Летучие мыши не строят для себя жилищ, обычно они живут колониями в пещерах. В некоторых пещерах могут собираться тысячи особей. Также они могут селиться и малочисленными колониями в 10-12 летучих мышей, в каком-нибудь дупле дерева.
Некоторые виды предпочитают жить на деревьях, свешиваясь с сучков и веток подобно листьям. Существуют два вида тропических мышей, которые делают маленькие навесы из листьев пальм. В Египте летучие мыши живут в пирамидах, в Австралии — на фруктовых деревьях. В Европе и Северной Америке они нередко селятся под одной крышей с человеком, устраиваясь на чердаках.
Большинство мышей активны в ночное время, хотя существуют и такие, котрые летают и днем. Для большинства летучих мышей пищей служат насекомые, некоторые питаются только фруктами, а другие — и насекомыми, и фруктами. Есть и такие, которые питаются рыбой, мясом и даже цветочным нектаром.
В тропической Америки большая остроносая летучая мышь, попадая в неволю, есть практически все: бананы, печенку, конину. Не отказывается даже от своих более мелких сородичей. В Индии есть вид летучих мышей, питающихся птицами, мышами и ящерицами.
Мыши вида ноктилио, обитающие в Центральной и Северной Америке, питаются рыбой. А одна из разновидностей летучих мышей, обитающих в джунглях Южной Америки, питается нектаром и пыльцой цветов.
Известные многим летучие мыши под названием вампир обитают в Центральной и Северной Америке. Они кусает коров, коз, лошадей и даже людей, высасывает немного крови и улетает.